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流式补偿上机未调节/下机后发现补偿有问题?
首先请自行解决FlowJO X 新版软件安装问题,懒人可以如我【某宝解决】。
本部分着重解决下机后不方便在原始机器上调补偿或者原始数据恰好被删除的情况(例如本人)。
前期工作:
1 流式上机(注:电压在机器上需提前调节好,此处不列举上机步骤攻略)
2 数据:实验管(FCS)
3 数据:补偿管(FCS)
一、软件界面-补偿模块
1 启动软件如下图:打开补偿管至软件中
2 处理补偿界面:打开补偿管后如下
**3 进入补偿调节页面:**按照下图1,2,3 步骤操作
二、补偿调节-自动部分
1 调节页面如下:(新建补偿调节之后能够自动进行补偿计算,但在未对样本圈群情况下,很难界定阴阳群,因此显示计算错误。红色标志是有严重问题不能用于补偿样本,转变为黄色标志后勉强能-自动计算。)
2 对补偿管进行“阴阳”圈群
1)具体调节步骤如下:
2)所有圈群完成后如下:
3 部分补偿管收集数据时质量太差,无法进行自动补偿调节,先删除。
具体如下:
4) 补偿应用后偏差部分还能进行手动调节
a)如下图:双击格子矩阵图标进行补偿编辑。
b)对补偿进行复制后编辑(已建立的补偿默认不更改)。
三、补偿调节-手动部分
针对自动补偿中,有个别样本不符合自动补偿调节的质量,只能进行手动调节。【参照以上方法打开补偿管后进行操作】
1 手动调节补偿页面如下:
**2 手动调节补偿:**即改变矩阵中的数值,观察图像的变化,最终达到“横平竖直”。
Tips:
1)黑色的图像为正在调节部分,随着补偿矩阵中数值的变化图像动态变化。
2)补偿矩阵中可以观察到100的数值,连成对角线;在补偿调整中可按对角线左边【针对通道,竖列调整成水平】;对角线右边【针对通道,横排调整成垂直】。
3)View【视图】选项中可以调整显示,以上为N×N视图观察,能观察到所有的图像;也可以选择特定通道观察,这样就是每次换通道都要选择。
四、补偿调节-小结
1 自动补偿方便的前提是所有补偿管的质量高,一旦选定含有的补偿通道难以更改(我这枪版这样)。
2 手动补偿针对补偿管数据质量不高的样本是福音,但对个人耐心是考验,且枪版软件容易卡壳。
3 补偿上机未调节,下机后发现补偿管质量差无法补救?
先用质量好的补偿管数据建立少几个通道的补偿,保存数值。再重新建立手动补偿,复制自动补偿部分,手动增加剩余部分,保存补偿后应用到所有样本(每个补偿的颜色不同,看样本上显示的补偿颜色即知用的哪个补偿)。
建议:上机的时候就获得高质量补偿管;在流畅的机器或者软件上调好补偿;回来有问题可以微调;实在不行果断手动补偿
附录
三个图标分别点击后如下:
菱形:
圆形:
格子矩形: